ఉత్పత్తులు
2019-nCoV కోసం లైఫ్‌కాస్మ్ SARS-Cov-2-RT-PCR డిటెక్షన్ కిట్
ఆశించిన వినియోగం
ఈ కిట్ కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV) యొక్క గుణాత్మక గుర్తింపు కోసం గొంతు శుభ్రముపరచు, నాసోఫారింజియల్ స్వాబ్స్, బ్రోంకోఅల్వియోలార్ లావేజ్ ఫ్లూయిడ్, కఫం ఉపయోగించి ఉపయోగించబడుతుంది. ఈ ఉత్పత్తి యొక్క గుర్తింపు ఫలితం కేవలం క్లినికల్ సూచన కోసం మాత్రమే మరియు దీనిని మాత్రమే ఉపయోగించకూడదు క్లినికల్ డయాగ్నసిస్ మరియు చికిత్స కోసం సాక్ష్యం. రోగి యొక్క క్లినికల్ వ్యక్తీకరణలు మరియు ఇతర ప్రయోగశాల పరీక్షలతో కలిపి పరిస్థితి యొక్క సమగ్ర విశ్లేషణ సిఫార్సు చేయబడింది.
తనిఖీ సూత్రం
కిట్ ఒక-దశ RT- PCR సాంకేతికతపై ఆధారపడి ఉంటుంది.వాస్తవానికి, 2019 కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV) ORF1ab మరియు N జన్యువులు విస్తరణ లక్ష్య ప్రాంతాలుగా ఎంపిక చేయబడ్డాయి.నిర్దిష్ట ప్రైమర్‌లు మరియు ఫ్లోరోసెంట్ ప్రోబ్‌లు (N జన్యు ప్రోబ్‌లు FAMతో లేబుల్ చేయబడ్డాయి మరియు ORF1ab ప్రోబ్‌లు HEXతో లేబుల్ చేయబడ్డాయి) నమూనాలలో 2019 కొత్త-రకం కరోనావైరస్ RNA ను గుర్తించడానికి రూపొందించబడ్డాయి.కిట్‌లో నమూనా సేకరణ, RNA మరియు PCR యాంప్లిఫికేషన్ ప్రక్రియను పర్యవేక్షించడానికి అంతర్జాత అంతర్గత నియంత్రణ గుర్తింపు వ్యవస్థ (CY5తో లేబుల్ చేయబడిన అంతర్గత నియంత్రణ జీన్ ప్రోబ్) కూడా ఉంది, తద్వారా తప్పుడు ప్రతికూల ఫలితాలు తగ్గుతాయి.
ప్రధాన భాగాలు
| భాగాలు | వాల్యూమ్(48T/కిట్) |
| RT-PCR ప్రతిచర్య పరిష్కారం | 96µl |
| nCOV ప్రైమర్ TaqMan ప్రోబ్మిక్చర్ (ORF1ab,N జీన్,RnaseP జీన్) | 864µl |
| ప్రతికూల నియంత్రణ | 1500µl |
| nCOV పాజిటివ్ నియంత్రణ (l ORF1ab N జీన్) | 1500µl |
స్వంత కారకాలు: RNA వెలికితీత లేదా శుద్ధి కారకాలు.ప్రతికూల/అనుకూల నియంత్రణ: సానుకూల నియంత్రణ లక్ష్య భాగాన్ని కలిగి ఉన్న RNA, అయితే ప్రతికూల నియంత్రణ న్యూక్లియిక్ యాసిడ్-రహిత నీరు.ఉపయోగం సమయంలో, వారు వెలికితీతలో పాల్గొనాలి మరియు అంటువ్యాధిగా పరిగణించాలి.సంబంధిత నిబంధనలకు అనుగుణంగా వాటిని నిర్వహించాలి మరియు పారవేయాలి.
అంతర్గత సూచన జన్యువు మానవ RnaseP జన్యువు.
నిల్వ పరిస్థితులు మరియు గడువు తేదీ
-20±5℃, 6 నెలల వరకు చెల్లుబాటు అయ్యే 5 సార్లు కంటే ఎక్కువసార్లు గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడాన్ని నివారించండి.
వర్తించే పరికరం
FAM / HEX / CY5 మరియు ఇతర బహుళ-ఛానల్ ఫ్లోరోసెంట్ PCR పరికరంతో.
నమూనా అవసరాలు
1. వర్తించే నమూనా రకాలు: గొంతు శుభ్రముపరచు, నాసోఫారింజియల్ శుభ్రముపరచు, బ్రోంకోఅల్వియోలార్ లావేజ్ ద్రవం, కఫం.
2.నమూనా సేకరణ (అసెప్టిక్ టెక్నిక్)
ఫారింజియల్ శుభ్రముపరచు: టాన్సిల్స్ మరియు పృష్ఠ ఫారింజియల్ గోడను ఒకే సమయంలో రెండు శుభ్రముపరచుతో తుడిచి, ఆపై నమూనా ద్రావణాన్ని కలిగి ఉన్న పరీక్ష ట్యూబ్‌లో శుభ్రముపరచు తలను ముంచండి.
కఫం: రోగికి లోతైన దగ్గు వచ్చిన తర్వాత, నమూనా ద్రావణాన్ని కలిగి ఉన్న స్క్రూ క్యాప్ టెస్ట్ ట్యూబ్‌లో దగ్గిన కఫాన్ని సేకరించండి;బ్రోంకోఅల్వియోలార్ లావేజ్ ఫ్లూయిడ్: వైద్య నిపుణులచే నమూనా.3.నమూనాల నిల్వ మరియు రవాణా
వైరస్ ఐసోలేషన్ మరియు RNA పరీక్ష కోసం నమూనాలను వీలైనంత త్వరగా పరీక్షించాలి.24 గంటలలోపు కనుగొనబడే నమూనాలను 4℃ వద్ద నిల్వ చేయవచ్చు;24లోపు గుర్తించలేనివి
గంటలు -70℃ లేదా అంతకంటే తక్కువ వద్ద నిల్వ చేయాలి (-70℃ నిల్వ పరిస్థితి లేకపోతే, అవి ఉండాలి
తాత్కాలికంగా -20℃ రిఫ్రిజిరేటర్‌లో నిల్వ చేయబడుతుంది).నమూనాలు రవాణా సమయంలో పదేపదే గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడం నివారించాలి.సేకరించిన తర్వాత వీలైనంత త్వరగా నమూనాలను ప్రయోగశాలకు పంపాలి.నమూనాలను ఎక్కువ దూరం రవాణా చేయవలసి వస్తే, పొడి మంచు నిల్వ సిఫార్సు చేయబడింది.
పరీక్ష పద్ధతులు
1 నమూనా ప్రాసెసింగ్ మరియు RNA వెలికితీత (నమూనా ప్రాసెసింగ్ ప్రాంతం)
RNA వెలికితీత కోసం 200μl ద్రవ నమూనా తీసుకోవాలని సిఫార్సు చేయబడింది.సంబంధిత వెలికితీత దశల కోసం, వాణిజ్య RNA వెలికితీత కిట్‌ల సూచనలను చూడండి.ప్రతికూల మరియు ప్రతికూల రెండూ
ఈ కిట్‌లోని నియంత్రణలు వెలికితీతలో పాల్గొన్నాయి.
2 PCR రియాజెంట్ తయారీ (రియాజెంట్ తయారీ ప్రాంతం)
2.1 కిట్ నుండి అన్ని భాగాలను తీసివేసి, గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద కరిగించి కలపాలి.వినియోగానికి ముందు కొన్ని సెకన్ల పాటు 8,000 rpm వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్;రియాజెంట్ల అవసరమైన మొత్తాన్ని లెక్కించండి మరియు కింది పట్టికలో చూపిన విధంగా ప్రతిచర్య వ్యవస్థ తయారు చేయబడుతుంది:
| భాగాలు | N సర్వింగ్ (25µl సిస్టమ్) |
| nCOV ప్రైమర్ TaqMan ప్రోబ్మిక్చర్ | 18 µl × N |
| RT-PCR ప్రతిచర్య పరిష్కారం | 2 µl × N |
| *N = పరీక్షించిన నమూనాల సంఖ్య + 1 (ప్రతికూల నియంత్రణ) + 1 (nCOVసానుకూల నియంత్రణ) | |
2.2 భాగాలను పూర్తిగా కలిపిన తర్వాత, ట్యూబ్ గోడపై ఉన్న మొత్తం ద్రవాన్ని ట్యూబ్ దిగువకు పడేలా కొద్దిసేపు సెంట్రిఫ్యూజ్ చేసి, ఆపై 20 µl యాంప్లిఫికేషన్ సిస్టమ్‌ను PCR ట్యూబ్‌లోకి మార్చండి.
3 నమూనా (నమూనా తయారీ ప్రాంతం)
వెలికితీసిన తర్వాత 5μl ప్రతికూల మరియు సానుకూల నియంత్రణలను జోడించండి.పరీక్షించాల్సిన నమూనా యొక్క RNA PCR రియాక్షన్ ట్యూబ్‌కు జోడించబడుతుంది.
యాంప్లిఫికేషన్ డిటెక్షన్ ఏరియాకు బదిలీ చేయడానికి ముందు ట్యూబ్‌ను గట్టిగా క్యాప్ చేసి, సెంట్రిఫ్యూజ్ 8,000 ఆర్‌పిఎమ్ వద్ద కొన్ని సెకన్ల పాటు ఉంచండి.
4 PCR యాంప్లిఫికేషన్ (యాంప్లిఫైడ్ డిటెక్షన్ ఏరియా)
4.1 రియాక్షన్ ట్యూబ్‌ని పరికరం యొక్క నమూనా సెల్‌లో ఉంచండి మరియు పారామితులను ఈ క్రింది విధంగా సెట్ చేయండి:
| వేదిక | చక్రం సంఖ్య | ఉష్ణోగ్రత(°C) | సమయం | సేకరణసైట్ |
| రివర్స్లిప్యంతరీకరణ | 1 | 42 | 10నిమి | - |
| ప్రీ-డెనాటరేషియోn | 1 | 95 | 1 నిమిషం | - |
| చక్రం | 45 | 95 | 15సె | - |
| 60 | 30సె | వివరాల సేకరణ |
ఇన్‌స్ట్రుమెంట్ డిటెక్షన్ ఛానెల్ ఎంపిక: ఫ్లోరోసెన్స్ సిగ్నల్ కోసం FAM,HEX,CY5 ఛానెల్‌ని ఎంచుకోండి.సూచన ఫ్లోరోసెంట్ NONE కోసం, దయచేసి ROXని ఎంచుకోవద్దు.
5 ఫలితాల విశ్లేషణ (దయచేసి సెట్టింగ్ కోసం ప్రతి పరికరం యొక్క ప్రయోగాత్మక సూచనలను చూడండి)
ప్రతిచర్య తర్వాత, ఫలితాలను సేవ్ చేయండి.విశ్లేషణ తర్వాత, చిత్రం ప్రకారం బేస్‌లైన్ యొక్క ప్రారంభ విలువ, ముగింపు విలువ మరియు థ్రెషోల్డ్ విలువను సర్దుబాటు చేయండి (వినియోగదారు వాస్తవ పరిస్థితిని బట్టి సర్దుబాటు చేయవచ్చు, ప్రారంభ విలువను 3~15కి సెట్ చేయవచ్చు, ముగింపు విలువను సెట్ చేయవచ్చు 5~20, సర్దుబాటు) లాగరిథమిక్ గ్రాఫ్‌లో విండో యొక్క థ్రెషోల్డ్ వద్ద, థ్రెషోల్డ్ లైన్ లాగరిథమిక్ దశలో ఉంటుంది మరియు ప్రతికూల నియంత్రణ యొక్క యాంప్లిఫికేషన్ వక్రరేఖ సరళ రేఖ లేదా థ్రెషోల్డ్ లైన్ క్రింద ఉంటుంది).
6 క్వాటీ కంట్రోల్(పరీక్షలో విధానపరమైన నియంత్రణ చేర్చబడింది) ప్రతికూల నియంత్రణ:FAM, HEX, CY5 డిటెక్షన్ ఛానెల్‌ల కోసం స్పష్టమైన యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ లేదు
COV సానుకూల నియంత్రణ: FAM మరియు HEX డిటెక్షన్ ఛానెల్‌ల యొక్క స్పష్టమైన యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్, Ct విలువ≤32, కానీ CY5 ఛానెల్ యొక్క యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ లేదు;
పై అవసరాలు ఒకే ప్రయోగంలో ఏకకాలంలో తీర్చబడాలి;లేకపోతే, ప్రయోగం చెల్లదు మరియు పునరావృతం చేయాలి.
7 ఫలితాల నిర్ధారణ.
7.1 పరీక్ష నమూనా యొక్క FAM మరియు HEX ఛానెల్‌లలో యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ లేదా Ct విలువ> 40 లేకుంటే మరియు CY5 ఛానెల్‌లో యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ ఉంటే, 2019 కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV) లేదని నిర్ధారించవచ్చు. నమూనాలో RNA;
.2 పరీక్ష నమూనా FAM మరియు HEX ఛానెల్‌లలో స్పష్టమైన యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్‌లను కలిగి ఉంటే మరియు Ct విలువ ≤40 అయితే, నమూనా 2019 కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV)కి సానుకూలంగా ఉందని నిర్ధారించవచ్చు.
7.3 FAM లేదా HEX యొక్క ఒక ఛానెల్‌లో మాత్రమే పరీక్ష నమూనా స్పష్టమైన యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్‌ను కలిగి ఉంటే మరియు Ct విలువ ≤40 అయితే మరియు ఇతర ఛానెల్‌లో యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ లేనట్లయితే, ఫలితాలను మళ్లీ పరీక్షించాల్సిన అవసరం ఉంది.పునఃపరీక్ష ఫలితాలు స్థిరంగా ఉంటే, నమూనా కొత్తదానికి సానుకూలంగా ఉన్నట్లు నిర్ధారించవచ్చు
కరోనావైరస్ 2019 (2019-nCoV).పునఃపరీక్ష ఫలితం ప్రతికూలంగా ఉంటే, 2019 కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV)కి నమూనా ప్రతికూలంగా ఉందని నిర్ధారించవచ్చు.
సానుకూల తీర్పు విలువ
ROC కర్వ్ పద్ధతి కిట్ యొక్క రిఫరెన్స్ CT విలువను నిర్ణయించడానికి ఉపయోగించబడుతుంది మరియు అంతర్గత నియంత్రణ సూచన విలువ 40.
పరీక్ష ఫలితాల వివరణ
1.ప్రతి ప్రయోగాన్ని ప్రతికూల మరియు సానుకూల నియంత్రణల కోసం పరీక్షించాలి.నియంత్రణలు నాణ్యత నియంత్రణ అవసరాలకు అనుగుణంగా ఉన్నప్పుడు మాత్రమే పరీక్ష ఫలితాలు నిర్ణయించబడతాయి
2.FAM మరియు HEX గుర్తింపు ఛానెల్‌లు సానుకూలంగా ఉన్నప్పుడు, సిస్టమ్ పోటీ కారణంగా CY5 ఛానెల్ (అంతర్గత నియంత్రణ ఛానెల్) నుండి ఫలితం ప్రతికూలంగా ఉండవచ్చు.
3.అంతర్గత నియంత్రణ ఫలితం ప్రతికూలంగా ఉన్నప్పుడు, tthe టెస్ట్ ట్యూబ్ యొక్క FAM మరియు HEX డిటెక్షన్ ఛానెల్‌లు కూడా ప్రతికూలంగా ఉంటే, , సిస్టమ్ నిలిపివేయబడిందని లేదా ఆపరేషన్ తప్పుగా ఉందని అర్థం, పరీక్ష చెల్లదు.అందువల్ల, నమూనాలను మళ్లీ పరీక్షించాల్సిన అవసరం ఉంది.
