ఉత్పత్తులు
2019-nCoV కోసం లైఫ్‌కాస్మ్ SARS-Cov-2-RT-PCR డిటెక్షన్ కిట్
అంచనా వేసిన వినియోగం
ఈ కిట్ గొంతు స్వాబ్‌లు, నాసోఫారింజియల్ స్వాబ్‌లు, బ్రోంకోఅల్వియోలార్ లావేజ్ ఫ్లూయిడ్, కఫం ఉపయోగించి కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV) యొక్క గుణాత్మక గుర్తింపు కోసం ఉపయోగించబడుతుంది. ఈ ఉత్పత్తి యొక్క గుర్తింపు ఫలితం క్లినికల్ రిఫరెన్స్ కోసం మాత్రమే, మరియు దీనిని క్లినికల్ డయాగ్నసిస్ మరియు చికిత్సకు ఏకైక సాక్ష్యంగా ఉపయోగించకూడదు. రోగి యొక్క క్లినికల్ వ్యక్తీకరణలు మరియు ఇతర ప్రయోగశాల పరీక్షలతో కలిపి పరిస్థితి యొక్క సమగ్ర విశ్లేషణ సిఫార్సు చేయబడింది.
తనిఖీ సూత్రం
ఈ కిట్ వన్-స్టెప్ RT- PCR టెక్నాలజీపై ఆధారపడి ఉంటుంది. వాస్తవానికి, 2019 కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV) ORF1ab మరియు N జన్యువులను యాంప్లిఫికేషన్ లక్ష్య ప్రాంతాలుగా ఎంపిక చేశారు. నిర్దిష్ట ప్రైమర్‌లు మరియు ఫ్లోరోసెంట్ ప్రోబ్‌లు (N జన్యు ప్రోబ్‌లు FAMతో లేబుల్ చేయబడ్డాయి మరియు ORF1ab ప్రోబ్‌లు HEXతో లేబుల్ చేయబడ్డాయి) నమూనాలలో 2019 కొత్త-రకం కరోనావైరస్ RNAను గుర్తించడానికి రూపొందించబడ్డాయి. నమూనా సేకరణ, RNA మరియు PCR యాంప్లిఫికేషన్ ప్రక్రియను పర్యవేక్షించడానికి, తద్వారా తప్పుడు ప్రతికూల ఫలితాలను తగ్గించడానికి ఈ కిట్‌లో ఎండోజెనస్ అంతర్గత నియంత్రణ గుర్తింపు వ్యవస్థ (CY5తో లేబుల్ చేయబడిన అంతర్గత నియంత్రణ జన్యు ప్రోబ్) కూడా ఉంది.
ప్రధాన భాగాలు
| భాగాలు | వాల్యూమ్(48T/కిట్) |
| RT-PCR ప్రతిచర్య పరిష్కారం | 96μl |
| nCOV ప్రైమర్ TaqMan ప్రోబ్మిక్చర్ (ORF1ab,N జీన్,RnaseP జీన్) | 864μl |
| ప్రతికూల నియంత్రణ | 1500μl |
| nCOV పాజిటివ్ నియంత్రణ (l ORF1ab N జీన్) | 1500μl |
సొంత కారకాలు: RNA వెలికితీత లేదా శుద్దీకరణ కారకాలు. ప్రతికూల/సానుకూల నియంత్రణ: లక్ష్య భాగాన్ని కలిగి ఉన్న RNA అనేది సానుకూల నియంత్రణ, అయితే ప్రతికూల నియంత్రణ అనేది న్యూక్లియిక్ ఆమ్లం లేని నీరు. ఉపయోగం సమయంలో, అవి వెలికితీతలో పాల్గొనాలి మరియు అంటువ్యాధిగా పరిగణించాలి. సంబంధిత నిబంధనలకు అనుగుణంగా వాటిని నిర్వహించాలి మరియు పారవేయాలి.
అంతర్గత సూచన జన్యువు మానవ RnaseP జన్యువు.
నిల్వ పరిస్థితులు మరియు గడువు తేదీ
-20±5℃, 5 సార్లు కంటే ఎక్కువసార్లు గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడం మానుకోండి, 6 నెలల వరకు చెల్లుతుంది.
వర్తించే పరికరం
FAM / HEX / CY5 మరియు ఇతర మల్టీ-ఛానల్ ఫ్లోరోసెంట్ PCR పరికరంతో.
నమూనా అవసరాలు
1.వర్తించే నమూనా రకాలు: గొంతు స్వాబ్‌లు, నాసోఫారింజియల్ స్వాబ్‌లు, బ్రోంకోఅల్వియోలార్ లావేజ్ ద్రవం, కఫం.
2. నమూనా సేకరణ (అసెప్టిక్ టెక్నిక్)
ఫారింజియల్ స్వాబ్: టాన్సిల్స్ మరియు పృష్ఠ ఫారింజియల్ గోడను ఒకేసారి రెండు స్వాబ్‌లతో తుడవండి, ఆపై స్వాబ్ హెడ్‌ను శాంప్లింగ్ ద్రావణం ఉన్న టెస్ట్ ట్యూబ్‌లో ముంచండి.
కఫం: రోగికి తీవ్రమైన దగ్గు వచ్చిన తర్వాత, దగ్గిన కఫాన్ని నమూనా ద్రావణం ఉన్న స్క్రూ క్యాప్ టెస్ట్ ట్యూబ్‌లో సేకరించండి; బ్రోంకోఅల్వియోలార్ లావేజ్ ద్రవం: వైద్య నిపుణులచే నమూనా తీసుకోవడం. 3. నమూనాల నిల్వ మరియు రవాణా.
వైరస్ ఐసోలేషన్ మరియు RNA పరీక్ష కోసం నమూనాలను వీలైనంత త్వరగా పరీక్షించాలి. 24 గంటల్లోపు గుర్తించగల నమూనాలను 4℃ వద్ద నిల్వ చేయవచ్చు; 24 గంటల్లోపు గుర్తించలేని వాటిని
గంటలను -70℃ లేదా అంతకంటే తక్కువ ఉష్ణోగ్రత వద్ద నిల్వ చేయాలి (-70℃ నిల్వ పరిస్థితి లేకపోతే, అవి
తాత్కాలికంగా -20℃ రిఫ్రిజిరేటర్ వద్ద నిల్వ చేయబడుతుంది). రవాణా సమయంలో నమూనాలను పదే పదే గడ్డకట్టడం మరియు కరిగించడం నివారించాలి. నమూనాలను సేకరించిన తర్వాత వీలైనంత త్వరగా ప్రయోగశాలకు పంపాలి. నమూనాలను ఎక్కువ దూరాలకు రవాణా చేయాల్సి వస్తే, డ్రై ఐస్ నిల్వ సిఫార్సు చేయబడింది.
పరీక్షా పద్ధతులు
1 నమూనా ప్రాసెసింగ్ మరియు RNA వెలికితీత (నమూనా ప్రాసెసింగ్ ప్రాంతం)
RNA వెలికితీత కోసం 200μl ద్రవ నమూనా తీసుకోవాలని సిఫార్సు చేయబడింది. సంబంధిత వెలికితీత దశల కోసం, వాణిజ్య RNA వెలికితీత కిట్‌ల సూచనలను చూడండి. ప్రతికూల మరియు ప్రతికూల రెండూ
ఈ కిట్‌లోని నియంత్రణలు వెలికితీతలో పాల్గొన్నాయి.
2 PCR రియాజెంట్ తయారీ (రియాజెంట్ తయారీ ప్రాంతం)
2.1 కిట్ నుండి అన్ని భాగాలను తీసివేసి, గది ఉష్ణోగ్రత వద్ద కరిగించి కలపండి. ఉపయోగించే ముందు కొన్ని సెకన్ల పాటు 8,000 rpm వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయండి; అవసరమైన కారకాల మొత్తాన్ని లెక్కించండి మరియు కింది పట్టికలో చూపిన విధంగా ప్రతిచర్య వ్యవస్థ తయారు చేయబడుతుంది:
| భాగాలు | N సర్వింగ్ (25µl సిస్టమ్) |
| nCOV ప్రైమర్ TaqMan ప్రోబ్మిక్చర్ | 18 μl × N |
| RT-PCR ప్రతిచర్య పరిష్కారం | 2 μl × N |
| *N = పరీక్షించబడిన నమూనాల సంఖ్య + 1 (ప్రతికూల నియంత్రణ) + 1 (nCOV)(సానుకూల నియంత్రణ) | |
2.2 భాగాలను పూర్తిగా కలిపిన తర్వాత, ట్యూబ్ గోడపై ఉన్న ద్రవం అంతా ట్యూబ్ దిగువకు పడేలా కొద్దిసేపు సెంట్రిఫ్యూజ్ చేసి, ఆపై 20 µl యాంప్లిఫికేషన్ సిస్టమ్‌ను PCR ట్యూబ్‌లోకి జోడించండి.
3 నమూనా సేకరణ (నమూనా తయారీ ప్రాంతం)
వెలికితీసిన తర్వాత 5μl నెగటివ్ మరియు పాజిటివ్ నియంత్రణలను జోడించండి. పరీక్షించవలసిన నమూనా యొక్క RNA PCR ప్రతిచర్య గొట్టానికి జోడించబడుతుంది.
ట్యూబ్‌ను గట్టిగా మూసి, యాంప్లిఫికేషన్ డిటెక్షన్ ప్రాంతానికి బదిలీ చేసే ముందు కొన్ని సెకన్ల పాటు 8,000 rpm వద్ద సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయండి.
4 PCR విస్తరణ (విస్తరించిన గుర్తింపు ప్రాంతం)
4.1 పరికరం యొక్క నమూనా సెల్‌లో ప్రతిచర్య ట్యూబ్‌ను ఉంచండి మరియు పారామితులను ఈ క్రింది విధంగా సెట్ చేయండి:
| వేదిక | సైకిల్ సంఖ్య | ఉష్ణోగ్రత(°C) | సమయం | సేకరణసైట్ |
| రివర్స్ట్రాన్స్క్రిప్షన్ | 1 | 42 | 10నిమి | - |
| ప్రీ-డీనాచురేషియోn | 1 | 95 | 1నిమి | - |
| సైకిల్ | 45 | 95 | 15సె | - |
| 60 | 30లు | డేటా సేకరణ |
ఇన్స్ట్రుమెంట్ డిటెక్షన్ ఛానల్ ఎంపిక: ఫ్లోరోసెన్స్ సిగ్నల్ కోసం FAM、HEX、CY5 ఛానెల్‌ని ఎంచుకోండి. రిఫరెన్స్ ఫ్లోరోసెంట్ NONE కోసం, దయచేసి ROXని ఎంచుకోవద్దు.
5 ఫలిత విశ్లేషణ (సెట్టింగ్ కోసం ప్రతి పరికరం యొక్క ప్రయోగాత్మక సూచనలను చూడండి)
ప్రతిచర్య తర్వాత, ఫలితాలను సేవ్ చేయండి. విశ్లేషణ తర్వాత, లాగరిథమిక్ గ్రాఫ్‌లో ఇమేజ్ ప్రకారం బేస్‌లైన్ యొక్క ప్రారంభ విలువ, ముగింపు విలువ మరియు థ్రెషోల్డ్ విలువను సర్దుబాటు చేయండి (వినియోగదారు వాస్తవ పరిస్థితికి అనుగుణంగా సర్దుబాటు చేయవచ్చు, ప్రారంభ విలువను 3~15కి సెట్ చేయవచ్చు, ముగింపు విలువను 5~20కి సెట్ చేయవచ్చు, సర్దుబాటు చేయవచ్చు). విండో థ్రెషోల్డ్ వద్ద, థ్రెషోల్డ్ లైన్ లాగరిథమిక్ దశలో ఉంటుంది మరియు ప్రతికూల నియంత్రణ యొక్క యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ సరళ రేఖ లేదా థ్రెషోల్డ్ లైన్ క్రింద ఉంటుంది).
6 క్వాటీ నియంత్రణ (పరీక్షలో విధానపరమైన నియంత్రణ చేర్చబడింది) ప్రతికూల నియంత్రణ: FAM, HEX, CY5 గుర్తింపు ఛానెల్‌లకు స్పష్టమైన యాంప్లిఫికేషన్ వక్రత లేదు.
COV పాజిటివ్ నియంత్రణ: FAM మరియు HEX డిటెక్షన్ ఛానెల్‌ల యొక్క స్పష్టమైన యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్, Ct విలువ≤32, కానీ CY5 ఛానెల్ యొక్క యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ లేదు;
పైన పేర్కొన్న అవసరాలు ఒకే ప్రయోగంలో ఒకేసారి తీర్చబడాలి; లేకపోతే, ప్రయోగం చెల్లదు మరియు పునరావృతం చేయవలసి ఉంటుంది.
7 ఫలితాల నిర్ధారణ.
7.1 పరీక్ష నమూనా యొక్క FAM మరియు HEX ఛానెల్‌లలో యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ లేదా Ct విలువ> 40 లేకపోతే, మరియు CY5 ఛానెల్‌లో యాంప్లిఫికేషన్ కర్వ్ ఉంటే, నమూనాలో 2019 కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV) RNA లేదని నిర్ధారించవచ్చు;
.2 పరీక్ష నమూనా FAM మరియు HEX ఛానెల్‌లలో స్పష్టమైన యాంప్లిఫికేషన్ వక్రతలను కలిగి ఉంటే మరియు Ct విలువ ≤40 అయితే, ఆ నమూనా 2019 కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV) కు సానుకూలంగా ఉందని నిర్ధారించవచ్చు.
7.3 పరీక్ష నమూనా FAM లేదా HEX యొక్క ఒక ఛానెల్‌లో మాత్రమే స్పష్టమైన యాంప్లిఫికేషన్ వక్రతను కలిగి ఉంటే, మరియు Ct విలువ ≤40 అయితే, మరియు మరొక ఛానెల్‌లో యాంప్లిఫికేషన్ వక్రత లేకపోతే, ఫలితాలను తిరిగి పరీక్షించాల్సి ఉంటుంది. పునఃపరీక్ష ఫలితాలు స్థిరంగా ఉంటే, నమూనా కొత్తదానికి సానుకూలంగా ఉందని నిర్ధారించవచ్చు.
కరోనావైరస్ 2019 (2019-nCoV). పునఃపరీక్ష ఫలితం ప్రతికూలంగా ఉంటే, 2019 కొత్త కరోనావైరస్ (2019-nCoV) కు నమూనా ప్రతికూలంగా ఉందని నిర్ధారించవచ్చు.
సానుకూల తీర్పు విలువ
కిట్ యొక్క రిఫరెన్స్ CT విలువను నిర్ణయించడానికి ROC కర్వ్ పద్ధతి ఉపయోగించబడుతుంది మరియు అంతర్గత నియంత్రణ రిఫరెన్స్ విలువ 40.
పరీక్ష ఫలితాల వివరణ
1.ప్రతి ప్రయోగం ప్రతికూల మరియు సానుకూల నియంత్రణల కోసం పరీక్షించబడాలి. నియంత్రణలు నాణ్యత నియంత్రణ అవసరాలను తీర్చినప్పుడు మాత్రమే పరీక్ష ఫలితాలను నిర్ణయించవచ్చు.
2.FAM మరియు HEX డిటెక్షన్ ఛానెల్‌లు సానుకూలంగా ఉన్నప్పుడు, సిస్టమ్ పోటీ కారణంగా CY5 ఛానెల్ (అంతర్గత నియంత్రణ ఛానెల్) నుండి ఫలితం ప్రతికూలంగా ఉండవచ్చు.
3.అంతర్గత నియంత్రణ ఫలితం ప్రతికూలంగా ఉన్నప్పుడు, టెస్ట్ ట్యూబ్ యొక్క FAM మరియు HEX డిటెక్షన్ ఛానెల్‌లు కూడా ప్రతికూలంగా ఉంటే, , అంటే సిస్టమ్ నిలిపివేయబడిందని లేదా ఆపరేషన్ తప్పు అని, పరీక్ష చెల్లదని అర్థం. కాబట్టి, నమూనాలను తిరిగి పరీక్షించాలి.
